酷游ku119网址

欢迎您访问武汉酷游ku119网址 科技有限公司官方网站!
站点地图 服务热线:400-6800-868
  • 产品
  • 文章

TECHNICAL COLUMN

学习资源

当前位置:首页 > 学习资源

PCR

发布者:酷游ku119网址 科技    发布时间:2021-05-19     
分享到:

实验室常用 DNA 聚合酶有三种: TaKaRa TaqTM,TaKaRa EXTaqTM 和Pyrobest TMDNA Polymerase。TaKaRa TaqTM 是一般的 DNA 聚合酶,保真性较差 ,但价钱便宜,一般用于基因表达的检测等。TaKaRa EXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐热性 DNA 聚合酶,具有一定的保真性,而且其扩增得到的 PCR 产物 3’端附有一个 “A”碱基,如果希望直接将产物克隆 到 T-vector 可以用此酶。Pyrobest TM DNA Polymerase 也是具有 Proof reading 活性的耐热性 DNA 聚合酶,其特点是保真性极高,扩增得到的 PCR 产物为平滑末端。如果进行基因的扩增请使用此酶。


1.按下列组成在 PCR 反应管中调制反应液:TaKaRa TaqTM或 TaKaRa EXTaqTM的配方


TA1.png

TA2.png


① 反应总体积根据实际情况进行调控,可以做 20~50?l 以节约试剂;

② 将上表各成分加入到 0.2ml 或 0.5ml 灭菌的 PCR 薄壁管中;

③ 如果不用 PCR 仪的加热盖,在反应混合液的上层加 30 ~50?l 的矿物油防止样品在 PCR 的过程中蒸发;


2. 按以下程序进行 PCR 扩增。

PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异,在实际操作中需根据具体的情况以及 PCR 结果而进行优化。


TA3.png


反应结束后,抽取扩增样品 5ul,用琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果,用DNA marker 判断扩增片段的大小或冷冻保存,以备以后分析使用。

技术专栏分类
  • 高品质保障 先进的生产研发技术
  • 高性价比 价宜质优,性价比高
  • 高效省心 从购买到使用,放心无忧
  • 安全运输 完善的保护措施安全运输

微信扫码在线客服

微信咨询

全国免费技术支持

400-6800-868

在线客服