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Immunochemistry:Caspase-1活性检测试剂盒

发布者:酷游ku119网址 科技    发布时间:2022-12-15     
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程序性细胞死亡 (Programmed cell death, PCD) 是多细胞生物中,由基因调控的细胞自杀过程,常见的PCD包括细胞焦亡(Pyroptosis)、凋亡(Apoptosis)和自噬(Autophagy)。  


程序性细胞死亡


类型细胞凋亡(Apoptosis)细胞焦亡(Pyroptosis)细胞自噬(Autophagy)
定义为维持内环境稳态而发生的细胞主动死亡的过程,不产生炎症。又称细胞炎性坏死,炎性小体引发的一种程序性细胞死亡方式。细胞通过溶酶体(如动物)或液泡(如植物、酵母菌)降解自身组分的死亡过程。
细胞结构细胞形态缩小细胞膨大,变形产生空泡
细胞膜膜结构完整细胞膜破裂膜结构正常
细胞器完整变形被自噬体吞噬,最后被溶酶体消化
   常见的检测方式Caspase-2/3/6/7/8/9/10活性测定;PARP断裂分析;Annexin-V-FITC/PI法检测细胞膜变化;线粒体膜电位(JC-1、JC-10);TUNEL法检测DNA片段化caspase-1/4/5/11活性测定;Western Blot检测GSDMD的裂解;Western Blot、ELISA法检测IL-1β、IL-18炎症因子的切割成熟和释放水平Western Blot、ELISA法检测自噬标志蛋白LC3的转换(LC3-I/LC3-II);自噬体荧光单/双标法


今天我们就来聊一聊细胞焦亡(Pyroptosis)。当细胞发生焦亡时,由于细胞膜破裂导致内容物的释放,会激活强烈的炎症反应。细胞焦亡激活的通路包括依赖Caspase-1的经典途径和依赖Caspase-4、5、11的非经典途径。  


依赖Caspase-1的细胞焦亡经典途径:

Caspase-1首先被激活,激活的Caspase-1切割Gasdermin D,生成含氮端活性域的肽段,该结构域结合膜脂并在细胞膜上打孔,导致细胞渗透压的变化,进而发生胀大直至细胞膜破裂。同时,活化的Caspase-1对IL-1β和IL-18的前体进行切割,形成有活性的IL-1β和IL-18,并释放到胞外,募集炎症细胞聚集,扩大炎症反应。  


依赖Caspase-4、5、11的细胞焦亡非经典途径:

通常是细胞质脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)直接激活Caspase-4、Caspase-5和Caspase-11,活化的Caspase-4、5、11切割Gasdermin D产生与Caspase-1相同的裂解作用,从而导致细胞膜穿孔。

细胞质脂多糖

细胞焦亡与细胞凋亡相似,与细胞凋亡不同的是,细胞焦亡主要是由caspase-1激活的。因此检测caspase-1活性是细胞焦亡分析的关键。  


美国ICT的用于细胞焦亡分析的Caspase-1检测试剂盒利用FLICA?技术检测Caspase-1活性。这些试剂盒包含caspase-1抑制剂,该抑制剂包含caspase-1的首选结合序列Tyr-Val-Ala-Asp (YVAD)。FLICA试剂FAM-YVAD-FMK(最佳激发波长为488-492 nm,最佳发射波长为515-535 nm),是无细胞毒性的,细胞膜渗透抑制剂。进入细胞,并不可逆地与活化的caspase-1结合。任何未结合的FAM-YVAD-FMK-FLICA试剂扩散出细胞并被冲走。因此留在细胞内的绿色荧光直接体现了活性caspase-1酶活性的。荧光结果可通过荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪进行分析。


FAM-FLICA Caspase-1 AssayFAM-YVAD-FMK-FLICA.jpg
货号名称规格组分
97FAM-FLICA Caspase-1 Assay25Tests1. FLICA Caspase-1 Reagent (FAM-YVAD-FMK) 2. 10X Apoptosis Wash Buffer 3. Fixative 4. Propidium Iodide 5. Hoechst 33342
98100Tests
9145Pyroptosis/Caspase-1 Assay, Green25-50Tests1. FLICA Caspase-1 Inhibitor Reagent (FAM-YVAD-FMK) 2. 10X Cellular Wash Buffer 3. Fixative 4. Hoechst 33342 5. Nigericin
9146100-200Tests
9158Pyroptosis/Caspase-1 Assay,Far Red25-50Tests1. 660-YVAD-FMK caspase-1 inhibitor reagent 2. 10X Cellular Wash Buffer 3. Fixative 4. Hoechst 33342 5. Nigericin
9122FLICA 660 Caspase-1 Assay25-50Tests1. FLICA Caspase-1 Reagent (660-YVAD-FMK) 2. 10X Cellular Wash Buffer 3. Fixative
6698Nigericin(尼日尔霉素)0.5?moles

* 仅供科研使用,不得用于医疗. 

用阴性对照(非诱导的,A)或5 ng/mL的佛波酯PMA诱导处理的THP-1细胞

用阴性对照(非诱导的,A)或5 ng/mL的佛波酯PMA诱导处理的THP-1细胞,使其成为巨噬细胞样细胞(诱导的,B)。48小时后,从诱导种群中去除PMA,用含有10 ng/mL LPS的新鲜培养基替代,诱导caspase-1激活。2小时后,细胞被FAM-YVAD-FMK染色1小时,清洗,并在显微镜下观察。在诱导的样品中,许多细胞呈现亮绿色,表明caspase-1活性水平增加(B,诱导,右)。在非诱导的样品中,很少可见绿色细胞,表明caspase-1活性水平较低(a,非诱导,左)。   


美国ICT除了可提供全面的细胞活性检测相关试剂,包括凋亡、 caspase、 自噬、细胞毒性、坏死等相关检测,还可以同时提供高质量高灵敏度的 ELISA以及相关试剂,包括包被液、封闭液、 冲洗液、 底物、 终止液、 板子等等。 —————————————————————————————————————————— 

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